蛋白酶 K 来源于林伯氏白色念球菌，1ML，P5568-1ML，Sigma

General description

蛋白酶K是一种胞外内肽酶，它是由林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）合成的。蛋白酶K属于一类新的枯草杆菌蛋白酶亚家族。它是一种277个氨基酸的蛋白质，其特征是具有未水解的蛋白质链和自溶的多肽链。

Application

来自白色念球菌的蛋白酶K已被用于DNA片段化的原位检测和蛋白水解实验，用于测量白介素1ra（IL-1ra）的结构柔性。
在分离DNA和RNA的过程中，对核酸酶的蛋白水解失活起作用。
在分离DNA和RNA的过程中，用于核酸酶的蛋白水解失活。
用于去除内毒素结合的阳离子蛋白，如溶菌酶和核糖核酸酶A。
据报道，其可用于分离肝、酵母和绿豆线粒体
用于测定酶在细胞膜上的定位
用于石蜡包埋组织切片的处理，暴露用于抗体标记的抗原结合位点。
用于可传播海绵状脑病(TSE)研究中朊病毒脑组织样本蛋白的消化。
来自 Sigma 的酶已被用于消化密封的胞质侧面的内质网囊泡。在 原位 杂交之前，已将其用于蜜蜂解剖脑和/或整个蛹切片的脱蛋白。这是在研究神经肽 Y 样信号，和营养介导的基因表达和行为的蜜蜂时完成的。
来自白色念球菌的蛋白酶K已被用于：

• 在组织病理学研究中分解心肌
• HEK-293细胞消化过程

Biochem/physiol Actions

蛋白酶 K 具有广泛的特异性，即使在天然状态下也能降解许多蛋白质。主要裂解脂族和芳香族氨基酸羧基附近的肽键，带有封闭的 α-氨基。 最适 pH 在 7.5-9.0 之间 ，等电点为 8.9。激活需要 Ca ²⁺ (1-5 mM)。蛋白酶 K 可被 DIFP 或 PMSF 抑制。
蛋白酶K是一种稳定且具有高活性的丝氨酸蛋白酶。晶体和分子结构研究证据表明该酶属于枯草素家族，具有活性位点催化三联体(Asp³⁹-His⁶⁹-Ser²²⁴)。它在一系列广泛的环境中均稳定：pH，缓冲盐，去污剂（SDS）以及温度。 在0.1-0.5% SDS存在的情况下，蛋白酶K可保持活性，在不损害分离DNA完整性的前提下，可以消化DNA制剂中的多种蛋白质和核酸酶。

Physical form

溶于含 10 mM Tris-HCl 的 40% (v/v) 甘油 (pH 7.5) 和 1 mM 醋酸钙中。

Preparation Note

溶液中的蛋白酶 K 在 4.0-12.5的 pH 范围内是稳定的（最适 pH 8.0），并且在使用期间在 25℃ 至 65℃ 的温度范围内也是稳定的。在 pH 8.0，4℃ 条件下，溶液可稳定储存至少 12 个月。在 pH4-11.5，含有 Ca²⁺（1-6mM）条件下，溶液预计可稳定储存数周。在 4℃ 条件下，80％ 硫酸铵悬浮液可稳定储存至少 12 个月。

Other Notes

在 pH7.5，37℃ 下，一个单位的酶将水解尿素变性血红蛋白，并产生相当于每分钟 1.0 μmol 酪氨酸的颜色（Folin-Ciocalteu 试剂的颜色）。