缺口转录混合物，200UL，11745808910，Roche

General description

优化的酶混合物：缺口转录利用DNA酶和DNA聚合酶组合切割DNA螺旋的一条链，然后在聚合酶检测或“校对”缺口位点时掺入标记的核苷酸。各模板在标准90分钟反应中产生一致的结果，得到的平均探针长度为200个碱基对，最长达到500个碱基对。

测定时间：100分钟

样品材料

• 超螺旋和线性质粒DNA
• 超螺旋和线性粘粒DNA
• 纯化的PCR产物

Application

生成用于荧光 原位 杂交（FISH）的高灵敏度探针。
缺口转录混合物被设计用于 原位 探针的直接荧光标记。来自Roche Applied Science的荧光素-12-dUTP和四甲基-罗丹明-5-dUTP或其他市售荧光标记核苷酸均可与缺口转录混合物一起使用。直接荧光标记的 原位 探针可用于检测中期染色体或间期细胞核上的多拷贝或非常大的杂交靶标。
对于使用1 μg 模板在20 μl总反应体积中进行的标准标记反应，需要使用4 μl的5x浓缩荧光标记混合物。

Biochem/physiol Actions

热灭活：通过添加1 μl 0.5 M EDTA (pH 8.0)、加热至65 °C并维持10分钟来终止反应。
缺口转录方法是基于DNase I能够在MgCl₂存在时，在低酶浓度条件下在DNA上随机产生缺口。
大肠杆菌DNA聚合酶I利用缺口的3′-OH末端作为引物，以5′?3′方向合成与完整链互补的DNA。DNA聚合酶I的5′?3′核酸外切活性能同时去除合成方向上的核苷酸。聚合酶活性用同位素标记的或半抗原标记的脱氧核糖核苷三磷酸依次替换去除的核苷酸。在低温（+ 15℃）条件下，反应中未标记的DNA被新合成的标记DNA取代。

Preparation Note

避免反复冻融。

Analysis Note

已通过斑点杂交试验测试功能。

Other Notes

仅用于生命科学研究。不可用于诊断操作。
缺口转录前，无需模板变性。
内容物

1小瓶，含5倍浓缩溶液，50％甘油（v/v）稳定反应缓冲液，DNA聚合酶I和DNase I。