KAPA2G Robust HotStart PCR 试剂盒，250UNITS，KK5516，Roche

General description

第二代KAPA2G Robust DNA聚合酶可用于解决多种扩增子类型（GC- 和AT-rich）的不一致扩增问题。该产品实现了更高的持续性和特异性活性，这意味着稳健的 PCR 性能、高灵敏度和对常见抑制剂的更高耐受性。KAPA2G Robust DNA 聚合酶的高性能非常适合挑战性 PCR 应用和样本，避免了使用多种酶和方案进行优化。

Application

KAPA2G Robust HotStart^® PCR 试剂盒已用于：

• 扩增富含 GC 或 AT 的模板
• 含有常见 PCR 抑制剂（例如，盐、尿素、SDS 或乙醇）的模板
• 粗制样本 PCR，例如口腔拭子，培养的哺乳动物、酵母或细菌细胞
• 菌落 PCR
• qPCR
• 嵌套聚合酶链式反应（PCR）扩增
• PCR 内 DNA 靶标的扩增
• 使用传统 PCR 进行 DNA 扩增
• 常规PCR

Biochem/physiol Actions

KAPA2G Robust HotStart^® DNA 聚合酶生成的 DNA 片段与野生型 Taq DNA 聚合酶生成的 DNA 片段具有相同的特征。它可用于常规下游应用，如限制性内切酶消化、克隆和测序。和野生型 Taq 一样，KAPA2G Robust HotStart 具有 5′→3′聚合酶和 5'→3′ 核酸外切酶活性，但是没有 3'→5′ 核酸外切酶（校正）活性。KAPA2G Robust HotStart 的精确性与野生型Taq相近。错配率约为每结合 1.7 x 10⁵ 个核甘酸错配 1 次。

Features and Benefits

有效扩增富含 GC 和 AT 的靶标

• 强力扩增富含 GC 和 AT 的模板
• 提高 PCR 成功率

• 从粗样本中有效扩增
• 每单位酶的产率和灵敏度更高

• 在大肠杆菌和酵母细胞直接 PCR 中具有更高的产量和更好的一致性

• KAPA2G Robust HotStart^® PCR 试剂盒（含 dNTP）含有 KAPA2G Robust HotStart DNA 聚合酶，专为高持续性和抑制剂耐受性而设计。
• 纯化的基因组 DNA 和粗制样品（例如菌落 PCR）均可用作模板。
• 每 25 μL 或更低体积的反应使用 0.5 U KAPA2G Robust HotStart DNA 聚合酶。更具挑战性的 PCR（富含 GC，粗制样本）可能需要更高的酶浓度。
• 每个循环的延伸时间设置为 15 sec/kb，对于困难扩增子或模板，增加到 30-60 sec/kb。
• 含有1.5mM MgCl₂ 的 KAPA2G 缓冲液（1X）。
• 可以使用试剂盒中提供的 25mM MgCl₂ 溶液额外添加 MgCl₂。
• KAPA2G 缓冲液 A 经过优化，具有高产量、特异性和灵敏度。
• KAPA2G 缓冲液 B 推荐用于抑制剂污染的模板样品。
• KAPA2G GC 缓冲液推荐用于富含 GC 的 PCR（>70% GC）。
• KAPA 增强剂 1 可与 KAPA2G 缓冲液 A 或 B 一起使用，特别适用于富含 GC 的 PCR 试验。
• 反应产物是3′-dA尾的，可以克隆到TA克隆载体中。

Preparation Note

在每次使用前，应确保产品已完全解冻并充分混合。短期使用时，可将试剂保存 4°C 条件下（最长 1 个月）。长期储存时，应将试剂放回 -20°C 环境中。如果所有组份在使用过程中非常仔细，没有受到污染，则试剂盒在短时间内（最多 3 天）被放置在室温下（无意中）预计不会失效。不建议在室温和 4°C 下长期储存。请注意，在 -20°C 以上的温度下储存的试剂在使用过程中受到污染时更容易降解，因此在超过 -20°C 的温度下储存的风险由用户自己承担。

Analysis Note

每批次 KAPA2G Robust HotStart^® DNA 聚合酶均已确认含有 <2％ 的污染蛋白（Agilent Protein 230 分析）。KAPA2G Robust HotStart PCR 试剂盒经过严格的质量控制测试，没有污染外源和内切酶活性，符合 DNA 污染水平的严格要求。

Other Notes

仅供研究使用。不可用于诊断操作。

Legal Information

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.