High Pure 组织RNA提取试剂盒，50ISOLATIONS，12033674001，Roche

General description

高纯核糖核酸组织试剂盒是为从组织样品中纯化完整的、不含任何污染性的脱氧核糖核酸的总核糖核酸而设计的。低至中等产量的核糖核酸分离。在离液盐（盐酸胍）存在下，核酸可与玻璃羊毛状物的表面结合。这使得高纯过滤管能够特异性地固定核酸（DNA和RNA），同时不含污染物。对于RNA分离，结合条件可以优化，以确保所有RNA的固定化。高纯度RNA分离试剂盒可以从广泛的研究样本材料中快速分离完整的总RNA，包括培养细胞、哺乳动物血液、白细胞(WBC)、酵母和细菌。它能迅速从哺乳动物组织中分离出总RNA，如老鼠的肝脏、脾脏、肺和心脏。

容量：高纯旋转过滤管可容纳700 μL样本量。
样品材料：固体组织（如小鼠肝、脾、肺、心脏）：1 - 25 mg。

注：样品大小取决于制备组织的方法；较大样品(>10 mg)应通过转子-定子均质化处理。

Application

高纯度RNA组织试剂盒已用于：

• 从人体细胞中提取总RNA，用于cDNA文库的生成
• 从培养细胞中提取总RNA用于实时PCR分析
• 提取大鼠海马状突起总RNA
• 从培养细胞和人类脊髓中纯化总RNA
• 从心室壁收集的组织中分离总RNA

• Northern印迹法
• RACE
• 引物延伸
• 差异显示
• RNase保护测定
• 体外翻译

Features and Benefits

• 在大约30分钟内制备核糖核酸样品。
• 获得适合下游应用的浓缩核糖核酸。
• 用一个试剂盒除去污染物最小化核糖核酸的损失，不需要沉淀或其他降解核糖核酸的处理步骤。
• 无需危险有机化合物的使用如氯化铯、苯酚、氯仿和溴化乙锭。

Preparation Note

在失活RNases的离液盐（盐酸胍）存在下，组织样本被破坏和均匀化。然后将匀浆加载到高纯旋转过滤管中的玻璃纤维羊毛状物上。在该方法使用的缓冲条件下，所有核酸均与高纯管中的玻璃纤维羊毛状物结合，而污染物（盐、蛋白质和其他污染物）则不会结合。制剂中的DNA被DNase I直接在过滤器上消化。简单的洗涤和旋转步骤就能很容易地去除被消化的DNA片段和其他细胞污染物。剩余的纯化RNA在少量的低盐缓冲液中洗脱。

Analysis Note

• 组织在裂解/结合缓冲液中破碎和均质化，并如所述进行纯化。
• 核糖核酸产量是通过测量260纳米的光密度来确定的。
• 完整性和大小分布通过变性琼脂糖凝胶中核糖体核糖核酸的条带模式来检测。
• 以逆转录酶MuLV和₁₅为引物，在**链合成中使用10 & # 956；L的核糖核酸洗脱液。在随后的聚合酶链反应中，使用扩增高保真聚合酶链反应系统和甘油醛3-磷酸脱氢酶（GAPDH）的特异性引物，获得了预期的983 bp的扩增产物。
• 通过聚合酶链反应进行检测，而没有预先的逆转录反应，结果为不存在污染性的脱氧核糖核酸；没有获得扩增产物。

Other Notes

高纯技术和二氧化硅吸附试剂盒
仅用于生命科学研究。不用于诊断操作。
图1：不同均质化程序的比较。使用各种程序均质化小鼠肝脏。用高纯核糖核酸组织试剂盒从每种匀浆中纯化总核糖核酸。分离的核糖核酸的等分试样用特异性针对谷氨酸脱羧酶基因区域的引物进行反向转录。通过凝胶电泳分析cDNA产物。

泳道1：均质化：Ultra Turrax；产量：1.9 & # 956；g/mg组织；A 260/ A 280 ： 2.0
泳道2：均质化：电动一次性塑料杵；产量：3 & # 956；g/mg组织；A 260 /A 280 ： 2.0
泳道3：均质化：研钵和杵，20 G针头；产量：1.5 & # 956；g/mg组织；A 260 /A 280 ： 2.0
泳道4：均质化：手动一次性塑料杵，20 G针头；产量：1.8 & # 956；g/mg组织；A 260 /A 280 ： 2.0
泳道5：均质化：手动一次性塑料杵；产量：3.4 & # 956；g/mg组织；A 260 /A 280 ： 2.0
泳道6：均质化：小珠涡旋；产量：3 & # 956；g/mg组织；A 260 /A 280 ： 2.0
泳道7：分子量标记

• 裂解/结合缓冲液
• 脱氧核糖核酸酶ⅰ，冻干
• 脱氧核糖核酸酶孵育缓冲液
• 洗涤缓冲液I
• 洗涤缓冲液II
• 洗脱缓冲液
• 高纯纺丝过滤管（含玻璃纤维绒）
• 收集管