General description
CTCF,也称为CCCTC结合因子,包含11个锌指(ZF)结合域,使其能够结合不同的DNA靶序列和蛋白质。这种多功能蛋白可以用作转录激活因子或阻遏因子。转录阻遏因子,CTCF,可与脊椎动物c-myc基因的启动子结合。它还与PLK和PIM1启动子结合。CTCF可能阻止转录激活因子与增强子结合。CTCF还可充当APP的转录激活因子。它涉及基因调控的不同方面,包括启动子激活或抑制、激素反应性基因沉默、甲基化依赖性染色质绝缘和基因组印迹。该基因中CTCF的突变与浸润性乳腺癌,前列腺癌和Wilms肿瘤有关,这表明CTCF可能起抑癌作用。
~ 130 kDa
注释: 聚(ADP-核糖基)化同工型,C端截短或SUMO化会导致CTCF蛋白在SDS–PAGE上发生可变迁移,这可能会在蛋白质印迹上使CTCF具有不同的分子量。修饰取决于细胞类型和生长条件。
文献报道了以下分子量:180 kDa(CTCF-180),130 kDa(CTCF-130),82 kDa(CTCF-82),70 kDa(CTCF-70)。有关更多详细信息,请参见Klenova,E.M.,et al, (1997) Nucleic Acids Res. 25, 466–473 and Torrano,V,et al, (2006) Journal of Cell Science 119, 1746-1759)。
对每批、每次的全部ChIPAb+抗体的染色质沉淀进行单独验证。每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物(通过qPCR对每个批次进行检测),以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列,使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体,以确保ChIP反应的特异性。
ChIPAb+ CTCF组包括CTCF抗体,阴性对照抗体(正常小鼠IgG)和qPCR引物,可扩增人H19内部对照区域的165 bp区域。CTCF和阴性对照抗体以可扩展的“每个ChIP”反应大小提供,可用于功能上验证与 CTCF相关染色质的沉淀。
Immunogen
带His标签的重组蛋白,对应于人CTCF。
Application
染色质免疫沉淀:
使用2 µg正常小鼠IgG或2 µg抗CTCF和Magna ChIP
使用ChIP引物,人H19 ICR作为阳性基因座和代表性的已发表的阴性基因座,通过qPCR验证了CTCF相关DNA片段的成功免疫沉淀(Wendt, K.S., et al., 2008)(请参见图)。 数据表示为每个IP样品相对于每个扩增子和ChIP样品的输入染色质的输入百分比。
请参阅EZ-Magna ChIP
蛋白质印迹分析:
代表性批次数据。
K562细胞裂解液通过电泳分离,转移至PVDF膜上,并用抗CTCF,克隆1.2.1.5.4(1 μg/mL)进行探测。
使用与HRP偶联的山羊抗小鼠和化学发光检测系统对蛋白质进行可视化(请参见图)。
文献中报道了以下分子量:180 kDa(CTCF-180),130 kDa(CTCF-130),82 kDa(CTCF-82),70 kDa(CTCF-70)。有关更多详细信息,请参见Klenova, E.M., et al, (1997) Nucleic Acids Res. 25, 466–473 and Torrano,V., et al, (2006) Journal of Cell Science 119, 1746-1759) 。
有关更多信息,请参见分子量部分。
ChIPAb+ CTCF组包括CTCF抗体,阴性对照抗体(正常小鼠IgG)&qPCR引物,可扩增人H19内部对照区域的165 bp区域。
Biochem/physiol Actions
可识别CTCF,Mr ~130 kDa。
Physical form
形式:纯化
抗-CTCF,(小鼠单克隆IgG1κ。一个小瓶,包含50 μg蛋白G纯化的小鼠单克隆IgG1κ,溶于含0.1 M Tris-甘氨酸(pH值7.4,150 mM NaCl)和0.05%叠氮化钠的缓冲液中,然后添加甘油至30%。储存于-20°C。
正常小鼠IgG。两个小瓶,包含25 µg纯化IgG,溶于25 µL储存缓冲液(含0.1%叠氮化钠)中。储存于-20°C。
ChIP引物,人H19 ICR。一个小瓶,包含75 μL 5 μM人H19内部对照区域特异性引物。储存于-20°C。
对于:CCC ATC TTG CT GACC TCAC
REV: AGA CCT GGG ACG TTT CTG TG
Analysis Note
对照
包括阴性对照小鼠IgG抗体和人H19 ICR特异性引物。
染色质免疫沉淀:
使用2 µg正常小鼠IgG或2 µg抗CTCF和Magna ChIP® G试剂盒(目录编号17-611)对从HeLa细胞制备的超声染色质(每个IP 1 X 106细胞当量,固定15分钟)进行染色质免疫沉淀。 使用ChIP引物人H19 ICR通过qPCR验证了CTCF相关DNA片段的成功免疫沉淀(请参见图)。
有关实验详细信息,请参阅EZ-Magna ChIP
Legal Information
MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
| biological source | mouse |
| Quality Segment | 100 |
| antibody form | purified immunoglobulin |
| clone | 1.2.1.5.4, monoclonal |
| species reactivity | human |
| manufacturer/tradename | ChIPAb+,Upstate® |
| technique(s) | ChIP: suitable,ELISA: suitable,dot blot: suitable,immunohistochemistry: suitable,immunoprecipitation (IP): suitable,multiplexing: suitable,western blot: suitable |
| isotype | IgG1κ |
| NCBI accession no. | NP_006556.1 |
| UniProt accession no. | P49711 |
| shipped in | dry ice |
| Gene Information | human ... CTCF(10664) |

