DNA 聚合酶 I, Klenow 片段 来源于大肠杆菌，100UNITS，D8276-100UN，Sigma

General description

DNA 聚合酶I 经蛋白酶消化产生两个断片（小断片和大断片）。大断片（Klenow 断片）丢失存在于完整全酶中的5′核酸外切酶活性。然而，它保留了聚合酶 5′→3 ′活性和天然酶的 3′→5 ′核酸外切酶活性。

Application

适用于：

• DNA 测序（Sanger 双脱氧法）
• cDNA 互补链的合成
• 将5′ -突出部分填入双链 DNA 形成钝端
• 采用寡核苷酸通过第二链合成进行DNA诱变
• 采用随机引物法标记 DNA

Preparation Note

酶溶液可用 50 mM Tris-HCl (pH 7.5)、100 mM 硫酸铵、10 mM 2-巯基乙醇和 1 mg/ml牛血清白蛋白稀释。

Analysis Note

在含 50 mM 磷酸钾 (pH 7.5)、3 mM MgCl ₂ 、1 mM 2-巯基乙醇、32.5 μM ³²P-dATP、32.5μM dTTP、62.5μg/ml poly (dA-dT) 和 0.01-1单位酶。

Other Notes

DNA 聚合酶 I 以溶于 50 mM Tris-HCl (pH 7.5)、1 mM EDTA、5 mM 二硫苏糖醇和 50% 甘油 (v/v) 的溶液形式提供。
在 37 °C下，一个单位在30分钟内将 10 毫微摩尔的脱氧核苷三磷酸转化为酸不溶性物质。